蛋白桑桑叶及桑白皮的抗衰老作用研究
桑科植物桑MorusL.作为药用植物已有悠久的历史,其资源广、易种植,是我国重要的经济树种。桑叶为桑的干燥叶,是常用的中药之一。现代药理学研究表明,桑叶具有抗菌、消炎、抗肿瘤、降J衄糖、降胆固醇、抗衰老等功效。在抗衰老方面,目前文献多对其抗氧化、清除自由基功能进行报道,但其他指标研究的报道较少。桑白皮为桑之根皮,具有消炎、利尿、解热、降糖、止咳、平喘等功效。近年来,国内外学者对蔡白皮的多种药理活性和药效进行了多方面的研究,但对其抗衰老、抗氧化作用的药效学研究未见报道。本论文选取桑叶及桑白皮的水、醇提取物为研究对象,采用了自然衰老小鼠模型,通过体外和体内试验,观察桑叶及桑白皮提取物在体内外抗氧化活性,以及对老龄小鼠脑组织单胺氧化酶活性、脾脏指数、血清性激素浓度及抗DNA分子损伤的影响,初步比较了桑叶及桑白皮抗衰老作用及其机理。桑叶及桑白皮提取物可显著抑制小鼠和蛋鸡心肌组织MDA的生成。醇提物六周,可显著提高老龄小鼠内脏组织SOD、CAT活性,抑制MDA生成提物六周,可显著抑制老龄小鼠内脏组织MDA生成,提高T―AOC水平,降低脑组织MAO-B活性以及降低细胞DNA损伤率。中文抽r要综上所述,桑叶水提物及75%醇提物的抗衰老作用可能是通过提高机体抗氧化能力、一定的延缓脑神经退化的功能、改善机体内分泌功能及提高细胞抗DNA损伤能力等途径实现的;桑白皮水提物具有一定的抗衰老作用,可能是通过改善老龄小鼠机体抗氧化能力、一定的延缓脑神经退化的功能以及提高细胞抗DNA损伤能力等途径实现的:桑叶水提物的抗衰老活性优于桑叶75%醇提物及桑白皮水提物。 前言随着科技的进步,生活和医疗水平的发展,人类的寿命相应延长,人口老龄化也相伴而来,这就意味着在新的世纪我们将迈进老年社会,因此,对衰老机制的研究和抗衰老药物的开发成为目前医药领域的一个重要课题。衰老或老化senescence是机体代谢过程中的一个必然阶段,主要表现为机体对环境的适应能力减弱以至丧失。衰老的机制颇为复杂,涉及到机体的各个系统的结构与功能的改变。有关老化的假说有很多,如氧化自由基学说、遗传程序学说、免疫衰退学说、DNA损伤修复学说、线粒体DNA损伤学说及激素衰老学说等。氧化自由基学说是在年由Harrnan提出,是目前比较公认的学说之一。该理论指出,过量自由基可通过过氧化作用攻击细胞膜及核酸、蛋白质和酶类等生物大分子,引起细胞膜上的不饱和脂肪酸产生脂质过氧化反应,核酸及蛋白质分子交联,DNA基因突变或复制异常及生物酶活力下降,最终导致细胞功能严重受损以至衰老、死亡。这样,一方面直接造成机体神经、内分泌及免疫等各系统的功能损伤与退化,同时也使神经、内分泌、免疫网络的调节功能逐渐衰退,致使机体应激能力降低,内环境的稳定性被破坏,导致自身免疫性疾病、骨质疏松、肿瘤等疾患的产生。对于奶牛、蛋鸡、种畜禽以及伴侣动物来说,延缓其衰老进程,对提高生产效率、延长利用周期并改善其健康状况也具有重要意义。另外,由于饲养环境的恶化、各种抗生索及有害添加剂的滥用都对动物的健康及产品安全造成了严重的不利影响。随着围际上食品安全、生态安全、动物福利等问题目益突出,不论盔保障人类健康方面,还是在促进畜牧生产上,都迫切需要研究开发环境融合型的技术和产品。我国传统的中医药具有毒副作用小、药效持久等特点,在抗衰老抗氧化的研究中占有越来越大的比重,使植物药的抗衰老功能显现出广泛的应用前景。我国传统的许多中医药都有抗氧化作用并且具有毒副作用小、药效持久等特点。随着现代人对于利用天然产物预防和治疗疾病观念的更新,使植物药的抗衰老功能在前言国、内外都得到了更广泛的开发和利用。植物药以其特有的化学成分及独特的疗效,在抗衰老抗氰化的研究中占有越来越大的比重。同样在动物生产上,开发中草药添加剂,提高其抗病抗应激能力,延长其生产周期,无疑在提高动物利用率、动物产品质量及经济效益上都具有十分重要的意义。在天然植物抗氧化研究中,黄酮类化合物flavonoids是研究较多的一类。黄酮类化合物具有多种生物活性,如抗炎、抗氧化、抗病毒、抗癌、免疫调节及抗衰老等活性。其作用的生物、药理活性基础是抗氧化作用清除自由基和对多种生物酶活性的影响作用。桑MorusalbaL,系荨麻目,桑科,桑属,多年木本植物,在中国和日本有广泛栽培。桑叶为桑的干燥叶,本品性寒,味甘苦,在《神农本草经》中被称为“神仙叶”,具有滋阴补血、疏散风热、清肺润燥、清肝明日、降压利尿之功效,是常用中药之一。桑叶中含有芸香苷、槲皮素、异槲皮素、二氢山萘等黄酮类化合物,含量占干叶重的1.O%一3.0%,是植物茎叶中黄酮类化合物含量较高的一种。其抗氧化之功效在国内、外已作较广泛的开发,作为各种保健品应用。桑叶不仅有很好的疗效,而且具有资源广、成本低、不易破坏资源和可持续发展等特点,其应用前景十分广阔。不仅对人具有保健作用,还可应用于动物。因此,将桑叶抗衰老抗氧化的药用价值进行开发和利用,对于人类与动物的抗病保健,降低药物成本等都具有更为现实的意义。目前的文献多对桑叶抗氧化、清除自由基功能进行报道,报道桑叶能提高小鼠对高温刺激的耐受能力和防止由于应激刺激引起的大鼠肾上腺皮质分泌功能低下;延长小鼠游泳及转棒时间,具有增强肌体耐力作用:延长果蝇的寿命,具有延缓衰老作用,但对其在抗衰老方面的其他作用则少见报道。本文将从分子、细胞、器官及整体动物几个方面对桑叶延缓机体衰老的作用及机理进行较系统的研究。桑的另一常用的药用部位为桑白皮。桑白皮为桑之根皮,明代李时珍著《本摹纲目》示:桑自皮主治消渴尿多。桑自皮性寒味甘,归肺经,具有消炎、利尿、解热、降糖、镇咳、祛痰等功效,在方剂中亦广泛使用。桑白皮中含桑根皮素、6前言桑皮醇、桑根酮、桑色素、桑素等黄酮成分以及伞形花内酯,东莨菪索,桑自皮多糖等。近年来,国外学者,尤其fj本学者,对桑白皮的多种药理活性和药效进行了多方面的研究,取得了一定成果。但对其抗衰老、抗氧化作用的研究末见报道。为了更科学地评价桑的抗衰老作用,以更好地利用资源,我们也对桑白皮是否具有抗衰老功效进了初步的研究。本文最终目的在于为人及动物抗衰老保健开发药效好、资源广、毒副作用小、产品价格低的药用植物资源提供科学依据。芎一章文献综述第一章文献综述第一节抗衰老中药的研究进展随着人口老龄化问题的日益加剧,与衰老相关的疾病如心血管疾病、糖尿病、老年性痴呆症及肿瘤等成为影响人类健康和生活的重要因素。对衰老机制的研究和抗衰老药物的开发是目前医药领域的一个重要课题。我国传统的中医药以其特有的化学成分及独特的疗效,在抗衰老抗氧化的研究中占有越来越大的比重。特别是现代人对于利用天然产物预防和治疗疾病观念的更新,使中医药在抗衰老方面得到了更f“泛的开发和利用。1衰老的机制研究衰老是生物体在生命周期中随着年龄增长而发生的全身各组织器官功能减退和稳态功能下降的过程,是机体各种生化反应的综合表现。人进入老年期后,人体结构与生理功能发生一系列变化:心功能降低,心肌逐渐萎缩,血液循环缓慢,如青年人每分钟脉搏为75次,而老年人脉搏减至每分钟50.60次,老年人心脏每分钟搏出血液量下降l/3;肺组织也逐渐萎缩,弹性减少,使肺活量减小,呼吸功能减弱:中枢神经系统的兴奋性与抑制性减弱,反应迟钝:肌肉力量减弱,肌肉由占人体重量的45%下降到25%;关节软骨交性,活动功能受到限制;免疫功能不断衰退,体力及工作能力上也反映出衰退。除了上述衰老现象的出现,还时常伴随许多疾病的发生,常见的有商血压、冠心病、肿瘤、慢性支气管炎等。伴随年龄增长而出现的各种疾病严重地影响了人类的健康,因此,现代医学中有关衰老及抗衰老机制研究日益受到重视。衰老是体内外许多因素,如环境污染、精神紧张、遗传等共同作用的结果,所以关于衰老的学说有很多种,如氧化自由基学说、遗传程序学说、免疫衰退学说、DNA损伤修复学说、线粒体DNA损伤学说及激素衰老学说等。 1.I氧化自由基学说氧化自由基学说又叫氧化损伤或氧化应激学说。该理论最早是在年提出并经后来的研究者不断充实而建立的,是目前比较公认的学说之一。该理论指出,机体内从一开始就时刻产生着自由基物质现在归入活性氧的概念,如超氧阴离子自由基、羟自由基、单线态氧、H、NO及过氧化皿硝酸盐类等,但同时又具有有效的自由基清除系统.,如超氧化物歧化酶SOD、过氧化氯酶、谷胱甘肽过氧化物酶等酶系统,还有许多非酶的自由基清除剂如维生素C、E及13.胡萝h索、谷胱甘肽等,使体内自由基维持在正常水平。随着年龄的增长,这种平衡逐渐被破坏,抗氧化酶类活性降低,体内清除氧自由基的能力受到影响,造成自由基的过剩。过量自由基可通过过氧化作用攻击细胞膜及核酸、蛋白质和酶类等生物大分子造成严重氧化损伤,使细胞膜上的不饱和脂肪酸产生脂质过氧化反应,核酸及蛋白质分子交联,DNA基因突变或复制异常及生物酶活力下降,最终导致细胞功能严重受损以至衰老、死亡。由此,~方面真接造成机体神经、内分泌及免疫等各系统的功能损伤与退化,同时也使神经、内分泌、免疫网络的调节功能逐渐衰退,机体因而逐渐趋于衰老。衰老过程中会引发各种老年病,老年病又会加速衰老的进程。衰老的自由基学说也是现代自由基生物学与自由基医学的重要内容。它的发展与充实和分子生物学、分子病理学、老年疾病病理学以及各种技术科学的发展都有着非常密切的关系。 1.2遗传程序学说任何生物都按照“出生、发育、成熟、衰老、死亡”五个阶段走完生命过程面表达出一定寿限,这是由遗传基因决定的。60年代,提出了衰老的遗传程序学说,认为衰老是由基因调控的程序化过程。20世纪90年代以来,陆续有报导第l、4、7号染色体与x染龟体上各自存在着与衰老有关的基因。随着研究的深入,有关衰老相关基因的报道也越来越多。如SEN6A、Hie.5、SM22、22newESTSs、等。近年来,端粒与端粗酶的发现使衰老的遗传程序学说有了新进展。端粒telomere是真核细胞染色体末端的重复DNA序列,染色体末端起保护作用,并决定细胞的复制与衰老。DNA每复制一次,端粒即丢失50~bp,当它缩短到一定程度时,细胞则停止分裂,衰老、死亡。4桑在养禽业上的应用桑叶营养丰富,其养分含量高于其他树叶。干叶中粗蛋白约为15~30%,糨脂肪约为扯10%,可溶性碳水化合物约为30~55%,粗纤维约为8~15%,其他钙、磷等含量也很高f蚓。桑叶的营养价值,与苜蓿相仿,比禾本科牧草高80%一%,比热带豆科牧草高40%.50%,在以牧草为生产基础的热带地区,配合桑叶饲料可提高饲料的营养价值。1个绵羊单位l天的进食量以鲜草计,约为1.5以.5干克。每公顷产45吨桑叶的杂交桑园,如果全部用于养羊,可以饲养45个绵羊单第一章文献绿述位,比经人工改造的南方山原草地的单位载畜量提高5倍左右。桑叶作为饲料尤其是青绿饲料的最显著特性是具有很高的消化率。另外,桑叶对所有家畜都具有很好的适口性,当动物首次接触桑叶时,很容易接受它而无采食障碍;如果动物已经熟悉了桑叶,则它会优先采食桑叶,而不是其它饲草。山羊对桑叶的干物质采食量很高.每同可达到其体重的4.2%;桑叶作为泌乳母牛的补充料.能够提高奶产量并降低饲料成本;桑叶作为幼犊牛的补充料,可以节约乳或代乳料的消耗量,并促进犊牛瘤胃的发育和生长;在产蛋鸡日粮中添加桑叶粉,可以改善蛋黄颜色,提高蛋重和产蛋量;还能碌著降低禽类粪中氨的排放量。我国畜牧业每年约消耗饲料粮~万吨。实践证明,先生产粮食再用于饲养畜禽的转化效率,不如直接种植饲料作物。我国人口不断增长,土地资源短缺。解决饲料完全赖以粮食转化已不现实。因此,桑叶饲料资源的开发将是一个富有前途的新领域。桑树还可栽于地边、路边、房前屋后、滩地、荒坡荒地等,可充分利用土地资源,不与其它作物争地。5小结近年来,国内外特别是日本的研究人员对桑的药理活性作了大量的研究,并依据其降低胆固醇、血脂和有效抑制致癌物质等特性,进~步研究其有效成份及作用机制,以便用桑叶制造防治老年病和癌症的新药,并开发桑叶茶、饮料和其它保健系列食品。在我国桑作为一种来源广、价格廉的药用植物资源,还尚未被很好地开发和利用。在珍贵药用植物资源越来越稀缺的情况下,应在这方面引起重视,进行更深入更广泛的研究开发,特别是面对当前人口老龄化问题,更应将其保健作用予以更好的开发和利用。而桑对于动物的应用也仅仅是把桑叶做为一种饲料来源,如果能进一步提取分离桑叶有效成分,将其应用于增加畜禽抗病力和提高畜产品质量上,那将是具有重要的现实意义的。供试药物桑叶,生品,产地河北桑白皮,生品,产地河北对照药物:野葛根PuerarialobataWilldOhwi,生品,产地广西2方法2.1供试药物制各本研究采取了水和乙醇两种方法进行提取。2.1.1水提取第二 桑叶及桑白皮的体夕卜抗氧化活性研究准确称取桑叶、桑白皮、葛根粉碎药材各分别置于mL圆底烧瓶中,加mL蒸馏水浸泡1小时后,沸水提3次,每次lh,合并三次滤液,置恒温水浴锅80。C浓缩干燥,然后研成粉末,放入干燥器备用。2.1.%醇提取准确称取桑叶、桑白皮、葛根粉碎药材各分别置于mL圆底烧瓶mL中,桑叶加mL95%乙醇,桑白皮和葛根加%K,醇,浸泡1小时后,加热回流提取3次,每次1h,合并三次滤液,于65。C减压蒸馏回收乙醇,得稠膏状浓缩药液,置恒温水浴锅80"Cq燥后,放入干燥器备用。2.2桑叶及桑自皮清除DPPH自由基活性的测定2.3.溶液配制提取物溶液:将葛根、桑叶及桑白皮水提物及95%醇提物分别配成浓度为lmg/ml提取物量的溶液,然后倍比稀释成一系列浓度。配完溶液后,以rpm离心30min,取上清液.4℃冰箱储存,备用。此后,国外又有很多学者用此法研究了物质清除自由基的性质。近年来,人们利用DPPH法研究羟基黄酮0,。V士SD与老年对照组比较:PO.05,#PO.01第三章橐叶及桑白皮体内抗裹老作用及机理研究小鼠心肌SOD活性与老年对照组差异显著P0.05;给药四周桑叶水提物小鼠心肌SOD活力,而到给药六周后可显著提高SOD活力的处理组增加,桑叶的水提物及醇提物的mg/kg、mg/kg两个剂量组以及阳性药对照组都表现P0.05。而桑白皮对SOD的活性则无影响P0.05。1.2桑叶及桑白皮提取物对老龄小鼠心肌组织MDA水平的影响结果见表3―2。从表中可以看出,各处理组都对老龄小鼠心肌MDA的水平有不同程度的影响。在给药四周和给药六周,青年对照组小鼠心肌MDA水平与老年对照组差异显著Po.05:给药四周后桑叶水提物mg/kg剂景组、桑叶阳性药对照组的MDA水平均著性降低PO.05;而在给药六周后则桑叶水提物mg/kg、mg/kg两个剂量组结果显著PO.05。表3-2桑叶及桑白皮提取物对老龄小鼠_DA生成的影晌n10,X士SD05,料P0,01与老年对照组比较:P0第三章桑叶及桑白皮像内抗衰老作用及机理研究1.3桑叶及桑自皮提取物对老龄小鼠肝脏组织CAT活性的影响结果见表3.3。从表中可以看出,青年对照组与老年对照组相比,绘药四周显著提高老龄小鼠心肌CAT活力,而给药六周后可显著提高CAT活力的处理组量组的CAT活性呈下降趋势,但影响不显著;VE对照组则对CAT的活性无影响。表3-3桑叶及桑白皮提取物对老龄小鼠CAT活性的影响n10.Ⅳ士SD与老年对照组比较:P0.05,#PO.01,#十PO..4桑叶及桑白皮提取物对老龄小鼠肝脏组织T-AOC的影响结果见表3.4。从表中可以看出,在给药四周后各处理组小鼠肝脏组织T-AOC比老年对照组均有所提高,但只有桑白皮水提物mg/kg剂量组结果显著P0.05;到给药六周后,各提取物处理组T-AOC仍然比空白对照组有所提高,第三 桑叶及桑白皮俸内抗衰老作用及机理研究和PO.叭,青年对照组T-AOC显著提高,vE对照组与老年对照组相比差别极显著PO.01。表3-4桑叶及桑白皮提取物对老龄小鼠T-AOC的影响与老年对照组比较:$PO.05,料PO.Ol2讨论机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系,该防御体系有酶促与非酶促两个体系。酶体系包括超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽酶等,非酶体系中主要为维生素、氨基酸、和金属蛋白质。防御体系各成份之间相互起到了协同作用,以及代偿作用与依赖作用。影响防御系统机能的因素很多,例如维生素的供应,铁、铜、锌、锰、硒等微量元素的吸收,以及年龄、激素水平等。这种机能的降低,常常导致各种疾病的产生,因而测量动物体的总抗氧化能力的高低具有很重要的意义。超氧化物歧化酶和过氧化氢酶是机体内非常重要的抗氧化酶,它们的功能是防止自由基引起的对生物膜和胞质的成分的损伤。通过这些酶可以消除超氧阴离子、有机氨过氧化物、过氧化氢等有害物质对组织的伤害,以保护细胞膜、蛋白质、DNA的完整性,从而保证组织功能的正常发挥。第三事桑叶及桑白皮体内抗衰老作用及机理研究MDA是氧自由基与生物膜多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物,可与核酸及蛋白质发生交联,使之受损。它产生的量与氧自由基的量相平行,亦与脂质过氧化的程度相平行,故检测MDA可反映氧自由基的水平及脂质过氧化的程度…。因此,本论文选择了SOD、CAT活性、丁_AOc水平及MDA含量作为探讨桑叶及桑白皮提取物抗氧化作用机制的几个指标。实验结果显示,青年对照组的各项指标与老年对照组相比,都有显著或极显著差异,说明本研究选取的自然衰老动物模型成立,可以做为各项指标研究的依据。桑叶及桑自皮的提取物分别具有不同程度的抗氧化活性,在给药四周后桑nf及桑白皮提取物已表现出了较明显的作用,但由于个体差异较大,有的剂量组的抗氧化作用并末表现出显著性;随着时间的延长,到给药六周后各剂量组抗氧化作用撮著性有所提高。桑叶水提物和醇提物均能够显著提高老龄小鼠心肌组织别是桑叶水提物高剂量组,在以上几个方面均表现出了极显著效果PO.01;桑白皮水提物能够显著提高肝脏组织总抗氧化能力和降低心肌组织中MDA含量,但对于心肌组织中SOD和肝脏组织中CAT的活性的影响不明显,预示其可能是通过提高其它酶的活性或提高非酶抗氧化系统活性来提高机体的总抗氧化能力T_AOC,此方面的机制还有待予深入研究。另外,桑自皮水提物在给药四周后对MDA水平具有显著影响,也使CAT的活性有所提高,但给药六周后,作用却有所降低,表明其在机体内的作用时间不宣过长,提示我们在应用此类药物时,需考虑药物最佳作用时间。第三 桑*-I-及桑白皮体内抗衰老作用反机理研究第二节桑叶及桑自皮对老龄小鼠脑组织单胺氧化酶_B活性的影响一、材料与方法1材料1.1实验动物KM小鼠,4月龄及15月龄,雌性,由中国医学科学院动物中心提供,合格证号:SCXKll.00―。动物饲养条件同第三章第一节见第47页。1.2主要试剂MAO.B测试盒南京建成生物工程研究所牛血清白蛋白北京华绿渊生物技术发展中心福林~酚试剂北京双翔达生化试剂厂批号:座机电话号码羧甲基纤维素钠CMC中国医药集团上海化学试剂公司座机F实验中所用其它试剂均为国产分析纯。溶液配制:福林-酚试剂试剂甲:1称取无水碳酸钠、49氢氧化钠溶解于1升蒸馏水中;2称取0.2g硫酸铜溶于20ml蒸馏水中;3称取O.49酒石酸钾钠溶于20ml蒸馏水中。在测定的当天将这三种溶液按:1:1的体积比混合,即得。1.3主要仪器及设备HC-TPl1B-5架盘药物天平北京医用天平厂R旋转蒸发器上海申生科技有限公司AR电子精密天平美国oHAUs公司GB电子分析天平瑞士Mettler.Toledo公司第三,■桑叶及票白皮体内抗衰老作用及机理研究MILLI―Q超纯水机美国MiUipore公司XHF―I内切式匀浆机宁波新芝生物科技股份有限公司OR低温高速离心机EppendrofLD5―10离心机北京医用离心机厂HW.SY系列电热恒温水浴锅北京市长风仪器仪表公司Helios―a紫外分光光度计ThermspetronicWH旋涡混匀器江苏太仓市科教器材厂CX.超声波清洗器北京医疗设备二厂+重庆银河试验仪器有限公司XMTA-P电热鼓风干燥箱0.20―ul系列移液器Finnpipette1.4供试药物及制各同本章第~节见48页。2方法2.1实验设计及饲养管理取15月龄雌性昆明种小鼠只,随机分成八组,每组15只:另外再取4月龄昆明雌性小鼠15只作为青年对照组。分组及饲养管理同本章第一节见第48页2.2动物的处理及样品采集给药六周后各处理组随机选取10只小鼠,取脑,称重,加9倍生理盐水,制成10%匀浆,普通离心机或低温低速离心机-09离心,取上清液立即进行检测。与老年对照组相比,桑叶及桑自皮提取物两个剂量组及醇提物mg/kg剂量组脾脏指数有所提高。青年对照组脾脏指数有所增加,但由于个体差异较大,与老年对照组相比无显著性差异po.05。表3-6桑叶及桑白皮提取物对老龄小鼠脾脏指数的影响i士sD胸腺和脾脏为机体主要免疫器官,随着年龄的增加,免疫器官逐渐萎缩,造成衰老机体免疫功能的低下18],而免疫系统结构老化与功能下降是衰老的主要原因与标志一l。老年时识别体内细胞或分子的细微变化能力下降,免疫清除能力减弱,因此细胞恶变发生率增高。近年来,越来越多的研究结果表明免疫反应性与老年个体的健康状态之问有着密切的联系,由于老年时免疫功能的衰退,老年人易患免疫缺陷病,如感染、自身免疫病、癌症、动脉硬化及神经细胞变性引起的痴呆、帕金森病等,因此有人称衰老是一种流行性免疫病。免疫系统的衰老是老年个体感染性疾病、癌症、自身免疫性疾病发生率、病死率增高的主要原因IlOI。本试验结果表明,桑叶及桑自皮对老龄小鼠脾脏指数无显著影响pO.05,但桑叶提取物有使老龄小鼠脾脏指数提高的趋势,那么桑叶是否对动物的免疫机能具有调节作用,有待于进一步的研究。6I第三章桑叶及桑白皮体内抗衰老作用及机理研究第四节桑叶及桑自皮对老龄小鼠血清中性激素浓度的影响一、材料与方法1材料1.1实验动物KM小鼠.4月龄及15月龄,雌性,由中国医学科学院动物中心提供,合1.00.。格证号:SCXKl动物饲养条件同第三章第一节见第47页。1.2主要试剂雌二醇、孕酮RIA检测盒北京北方生物技术研究所羧甲基纤维素钠CMC中国医药集团上海化学试剂公司批号F座机电话号码1.3主要仪器及设备HC?9?9TPIIB?9?95架盘药物天平北京医用天平厂R旋转蒸发器上海申生科技有限公司GB电子分析天平瑞士Mettler-Toledo公司LD5―10离心机北京医用离心机厂CX.超声波清洗器北京医疗设备二厂移液器O。20?9?9ul系列Finnpipette1.4供试药物及制备同本章第一节见第48页。2方法2.1实验设计及饲养管理取15月龄雌性昆明种小鼠只,随机分成八组,每组15只;另外再取4月龄昆明雌性小鼠15只作为青年对照组。分组及饲养管理同本章第一节见第47页。2.2动物的处理及样品采集2ml,分离血给药六周后各处理组随机选取10只小鼠,称重,摘眼球取m第三章桑叶及桑白皮体内抗衰老作用及机理研究清,于一20℃~30。C冰箱保存备用。2.3觑清中E2、P水平的测定采用放免法,检测小鼠血清中E2、P的浓度。2.4数据统计及分析同第一章第二节见第39页。二、结果与讨论I结果结果见表3-7。从表中可以看出,与老年对照组相比,青年对照组血清中雌二醇含量差异显著p0.05,孕酮含量差异极显著pO.01;阳性药使老龄小鼠血清中雌二醇显著降低pO.05;各提取物均使老龄小鼠皿清中雌二醇量组与老年对照组相比差异显著po.05。桑叶水提物mg/kg剂量组及醇提物mg/kg、mg/kg两个剂量组血清中孕酮浓度比老年对照组有所提高皮水提物对血清中孕酮浓度无影响。表3-7桑叶及桑白皮提取物对小鼠雌激素水平的影响nlO,X士SD与老年对照组比较:+PO.05,”PO.01第三章桑叶及桑白皮体内抗衰老作用及机理研究2讨论神经内分泌系统与免疫系统之间具有复杂的关系。内分泌系统和神经系统一起,共同调节机体的生长发育和各种代谢,维持内环境的稳定,并影响行为和控制生育等。神经内分泌系统同免疫系统间也有着密切的双向互相调节的联系,形成所谓神经内分泌免疫NIM网络。一方面免疫系统及其产物可以调节神经内分泌系统的功能;另一方面某些神经内分泌激素和激素受体己被包括在免疫系统的内源性成份内,它可以影响和调节免疫功能。内分泌系统主要通过激素来调节动物的生长发育与衰老过程。机体衰老最突出的表现在于性激素的改变。雌性动物卵巢分泌的性激素主要是雌激素进女性生殖器官的发育和副性征的出现,并维持在正常状态。此外,对神经系统下丘脑的性中枢、下丘脑前部的本温调节中枢以及下丘脑的血管运动中枢等和代谢机能骨骼代谢、脂代谢、水盐代谢和蛋白质代谢等也有明显的作用。 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